芹菜甲素是從傘形科植物芹菜中提取分離的有效成分，現(xiàn)代藥理研究表明芹菜素有降壓、鎮(zhèn)靜、抑菌等作用。但目前對(duì)其促智作用研究較少，本文采用三氯化鋁所致的老年性癡呆大鼠模型研究了芹菜甲素的促智及抑制含淀粉樣前體蛋白陽(yáng)性神經(jīng)元生成的作用。

實(shí)驗(yàn)方法：

1、三氯化鋁致老年性癡呆模型的建立

取健康大鼠40只，隨機(jī)分為4組：正常組、模型組及個(gè)給藥組，每組10只。除正常組外其余各組灌服三氯化鋁500mg/（kg.d），正常組灌服等容積的蒸餾水，第30天時(shí)用大鼠避暗法考察癡呆形成程度，待模型形成后，給藥組灌服三氯化鋁的同時(shí)給予高、低濃度的芹菜甲素，模型組和空白組給予蒸餾水，1mL/100g，1次/d，連續(xù)灌服75d。第75天開始進(jìn)行跳臺(tái)試驗(yàn)，第80d天處死大鼠，測(cè)定背海馬和齒狀回內(nèi)含淀粉樣前體蛋白神經(jīng)元的個(gè)數(shù)。

2、癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)定一跳臺(tái)法

跳臺(tái)箱底部為電柵板箱內(nèi)有一個(gè)高10cm的平臺(tái)。條件刺激為鈴聲，非條件刺激為足底電擊。其程序?yàn)殁徛?s，繼之以電擊10s，間隔20s。大鼠受到電擊跳上平臺(tái)稱之為被動(dòng)回避反應(yīng)；聽到鈴聲而未遭到電擊之前跳上平臺(tái)稱之為主動(dòng)回避反應(yīng)。每天訓(xùn)練10次，記錄主動(dòng)回避反應(yīng)的次數(shù)。

3、大鼠背海馬中含淀粉樣前提蛋白神經(jīng)元計(jì)數(shù)法

大鼠以20%烏拉坦麻醉后，打開胸腔灌流針頭自左心室插入主動(dòng)脈，先以0.9%氯化鈉溶液沖洗血液，以輸液器注4%入多聚甲醛。固定后立即取出大腦，置4%多聚甲醛中固定1～3h，以70%、80%、90%、95%的乙醇各脫水3h，無(wú)水乙醇脫水兩次，每次20min，此后以無(wú)水乙醇和二甲苯的混合液處理10min，二甲苯處理4min，進(jìn)行透明。60℃埋入石蠟中。切片，37℃恒溫箱中烤片，常規(guī)脫臘至水后，以蒸餾水配制的3%H2O2，室溫下泡5～10min以滅活內(nèi)源性酶，再以蒸餾水洗3次。再將切片泡入0.01M的枸櫞酸鹽緩沖液中，電爐加熱至沸騰后斷電，間隔5min后，反復(fù)2次，冷卻后以0.1M的磷酸鹽緩沖液洗滌2次。此后滴加正常山羊血清封閉液，室溫保持20min。甩去多余液體，滴加一抗，4℃過(guò)夜。0.1M的磷酸鹽緩沖液洗滌3次后，滴加生物素化山羊抗小鼠1gG,20~37℃,30min,0.1M的磷酸鹽緩沖液洗滌3次后,用3,3一二氨基苯聯(lián)胺顯色5min,蒸餾水洗滌。最后以蘇木素復(fù)染30s,脫水,透明,封片。光鏡下觀察統(tǒng)計(jì)背海馬和齒狀回內(nèi)含淀粉樣前提蛋白神經(jīng)元的個(gè)數(shù)。

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用DAS1.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用（X±S）表示，采用雙因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，以p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1、芹菜甲素對(duì)癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

與正常組相比,模型組大鼠的主動(dòng)回避反應(yīng)次數(shù)在訓(xùn)練的各天沒有明顯差異,均與模型組比較,芹菜甲素高、低兩個(gè)劑量組大鼠的主動(dòng)回避反應(yīng)次數(shù)在訓(xùn)練的各天升高均有顯著性差異。結(jié)果表明,三氯化鋁可明顯損害大鼠的學(xué)習(xí)記憶過(guò)程，芹菜甲素對(duì)癡呆模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙有明顯的改善作用。

2、芹菜甲素對(duì)癡呆大鼠背海馬和齒狀回內(nèi)β-APP陽(yáng)性神經(jīng)元的作用

與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠背海馬和齒狀回內(nèi)β-APP陽(yáng)性神經(jīng)元明顯增加。與模型組比較，芹菜甲素高、低兩個(gè)劑量均可使大鼠背海馬和齒狀回內(nèi)β-APP陽(yáng)性神經(jīng)元明顯減少。

用慢性鋁中毒的方法建立老年學(xué)習(xí)記憶障礙模型是研究老年性癡呆較為理想的模型之一。國(guó)內(nèi)有學(xué)者研究表明，三氯化鋁可明顯降低大鼠的回避反應(yīng)率，抑制回避反應(yīng)的保留。鋁可進(jìn)入腦內(nèi)取代鈣和鎂離子，同氨基酸鏈上的谷氨酸或精氨酸的羧基結(jié)合形成谷氨酸鋁鹽或精氨酸鋁鹽的穩(wěn)定復(fù)合物而沉積于腦內(nèi)，引起雙螺旋纖維蛋白異常磷酸化反應(yīng)，形成神經(jīng)元纏結(jié)，引起Aβ的形成而產(chǎn)生老年斑最終導(dǎo)致神經(jīng)元死亡。而Aβ由β-APP產(chǎn)生，因此可以通過(guò)抑制β-APP的產(chǎn)生而達(dá)到治療老年性癡呆的目的。海馬與學(xué)習(xí)記憶有密切的聯(lián)系，海馬中的膽堿能系統(tǒng)、單胺能系統(tǒng)、氨基酸能系統(tǒng)均為與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)的中樞神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，這些系統(tǒng)遞質(zhì)的正常傳遞有賴于海馬神經(jīng)元的正常功能，三氯化鋁可使大鼠海馬尤其是背海馬和齒狀回內(nèi)神經(jīng)元死亡，大鼠學(xué)習(xí)記憶能力降低。本研究結(jié)果表明，芹菜甲素可以有效對(duì)抗三氯化鋁所致的老年性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的降低，具有明顯的促智作用，可明顯減少癡呆大鼠背海馬和齒狀回內(nèi)β-APP陽(yáng)性神經(jīng)元的個(gè)數(shù)，對(duì)背海馬神經(jīng)元有一定的保護(hù)作用，但其確切的機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。